补骨脂对牙周炎大鼠牙移动保持期表达的影响

随着经济社会的发展，人们对于美观的要求不断提高，存在错颌畸形症状的成人正畸患者数量逐年增加，其中多数患者伴有不同程度的牙周疾病。由于牙周炎会导致牙周支持组织的病损，正畸主动治疗后牙周组织的恢复与适应将需要更长的时间。如何将中药应用于正畸领域，近年来逐渐引起研究人员的关注。中草药补骨脂（Psoralea Corylifolia Linn）为豆科类植被，味辛、苦，大温，无毒，有补肾行气、缩尿止带、健脾止泻的功效[1]。现代药理学研究表明其不仅具有雌激素样作用，还具有促进骨形成和抑制骨吸收的作用[2]。同时补骨脂因其药效，对预防骨质疏松症也有作用[3-5]。由成骨类细胞分泌的OPG（Osteoprotegerin），能抑制破骨细胞（Osteoclast，OC）形成和激活，减少牙槽骨破骨性的吸收。本文实验拟通过将补骨脂水煎液应用在牙周炎大鼠牙移动保持期，观察OPG表达变化，研究补骨脂在炎性牙周改建过程中的作用，为牙周炎患者正畸后缩短保持时间提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 每1 000 mL水中加100 g补骨脂干燥果实（购自陕西，经黑龙江中医药大学中药研究所鉴定符合2015版《中国药典》补骨脂质量控制标准）浸泡30 min，加热至沸腾半个小时后滤渣，将滤液浓缩至100 mL，即制成100%浓度的水煎剂，备用（含1 g生药/mL）。DAB显色剂、兔抗多克隆一抗（武汉博士德生物工程有限公司），二抗PV6001（北京中杉金桥生物科技有限公司）。

1.2 实验动物 选用8周龄健康雄性Wistar大鼠50只[购于佳木斯大学动物实验中心，许可证号：SCXK（黑）2013-001]，体重（220±20）g，适应环境1周后开始实验，最终纳入45只。

1.3 方法

1.3.1 分组 按照随机数字表法将45只建立牙周炎的大鼠分为3大组，每组15只，共9小组。空白对照组：将建立牙周炎后的大鼠牙移动21 d后处死。阴性对照组和实验组：各4小组（每一保持时间点设置1小组），牙周炎大鼠牙移动21 d后去除加力拉簧，在上颌左侧第一磨牙与前牙间安放保持器，分别保持3、7、14、21 d，于保持前1 d以补骨脂水煎液开始灌胃实验组大鼠，剂量为5.6 g/kg（约5.6 mL），1次/d，直到处死。无菌生理盐水等量灌胃阴性对照组大鼠。

1.3.2 动物实验模型的建立

1.3.2.1 建立大鼠牙周炎模型 以10%水合氯醛（佳木斯大学口腔医院药房提供）腹腔注射大鼠（3.5 mL/kg），动物安静后仰卧于操作台，拴牢头部和四肢，用自制开口器暴露视野，使用快速手机在大鼠双侧第一磨牙颈部颊腭方向靠近龈缘的地方制备一0.2 mm深固位沟，用0.2 mm结扎丝（正畸用型号）分别围着大鼠第一磨牙颈部一圈实施结扎，在腭方结扎并将结扎头尽量埋入龈沟里，待大鼠清醒后饲以高糖饮食4周。每天检查，如有损坏丢失及时重置。

1.3.2.2 建立大鼠牙移动模型 参照林鹏等[6]的方法，在大鼠上颌两颗前牙的唇舌面以及远中侧距离龈缘约0.5 mm处用快速手机磨出约0.2 mm的深沟。用0.2 mm正畸钢丝穿入镍钛拉簧后，一端通过前两颗磨牙之间于腭侧结扎，另一端嵌入中切牙固位沟内，用测力计测量，对第一磨牙向近中施加约50 g力后唇侧结扎，并用玻璃离子固定，连续牵拉21 d后去除拉簧。每天检查口内装置，如有损毁丢失应及时重置。

1.3.2.3 建立牙移动后保持模型 牵引21 d后去除大鼠口内装置，以上颌左侧牙弓作为保持侧，在左侧第一磨牙与中切牙间，使用0.25 mm正畸钢丝安放保持装置，右侧不保持。分别保持3、7、14、21 d，每一时间点处死5只，保持期间每天检查口内装置，如有脱落及时补救[7]。

1.3.3 免疫组化 以过量水合氯醛腹腔注射大鼠麻醉处死，解剖取出含磨牙区的上颌骨，修剪后固定于4%多聚甲醛液（北京鼎国昌盛生物技术有限公司，编号：AR-0211）24 h。之后浸泡于10%EDTA液（广州行知生物科技有限公司，编号：AAPR16-500）中于4 ℃脱钙约50 d，PBS冲洗干净组织块后石蜡包埋。以平行牙体长轴，从腭侧向颊侧的方向进行切片，获取近远中方向切片，选择断面为完整牙周韧带进行观察。OPG表达量以平均光密度（OD值）代表，每例牙根远中侧随机分析3个不同的高倍镜视野，取其平均值，该值越大，代表OPG表达越强。

1.4 统计学处理 使用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x-±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。采取多因素方差方法分析比较时间和药物因素对OPG表达量的影响，LSD多重检验方法对各组内不同时间段OPG表达量分析对比，P＜0.05为差异有统计学意义

文章来源：《水土保持通报》 网址: http://www.stbctbzz.cn/qikandaodu/2021/0722/759.html